【關(guān)鍵詞】  超濾技術(shù)

 【摘要】 目的 提高穿琥寧凍干粉針質(zhì)量。方法采用“高純度穿琥寧生產(chǎn)工藝"超濾技術(shù)生產(chǎn)穿琥寧凍干粉針并與其它廠家同類產(chǎn)品進(jìn)行動物急性毒性試驗(yàn)比較。結(jié)果超濾技術(shù)生產(chǎn)的注射用穿琥寧ld₅₀ 明顯高于其它廠家生產(chǎn)的同規(guī)格產(chǎn)品，單次靜脈給藥的ld₅₀ 達(dá)到910mg/kg，而國家標(biāo)準(zhǔn)說明書中的ld₅₀ 為675mg/kg，文獻(xiàn)資料報道穿琥寧注射劑的單次靜脈給藥的ld₅₀ 為580～620mg/kg。結(jié)論超濾技術(shù)可以大大降低注射用穿琥寧產(chǎn)品的毒性，提高臨床安全性。

博醫(yī)康典型中試凍干機(jī)  Pilot2-4M

注射用穿琥寧是采用爵床科植物穿心蓮提取物―穿心蓮內(nèi)酯經(jīng)酯化、脫水、成鹽而制成的脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯單鉀鹽，加入ph調(diào)節(jié)劑、碳酸氫鈉等藥用輔料經(jīng)冷凍干燥而制成的供肌肉注射或靜脈滴注用的無菌凍干粉針。用于病毒性肺炎、病毒性上呼吸道感染等。穿心蓮性寒、味苦，能清熱解毒，消炎止痛。可用于急性細(xì)菌性痢疾、急性胃腸炎、扁桃體炎、咽喉炎等。我國科研工作者于70年代初對穿心蓮提取物成分進(jìn)行了深入研究，結(jié)果表明，有效成分為其二萜類內(nèi)酯化合物。因二萜類內(nèi)酯化合物均難溶于水，無法滿足臨床需要，通過在內(nèi)酯結(jié)構(gòu)中引入不同的親水基團(tuán)，增加內(nèi)酯的水溶性，目前已制成了多種穿心蓮內(nèi)酯針劑，穿琥寧即是抗炎解熱作用，目前在臨床上已得到廣泛應(yīng)用，1992年被國家中醫(yī)藥管理局批準(zhǔn)為全國中醫(yī)院急診科（室）**中藥之一。

我們通過北京圖書館對近年在醫(yī)藥刊物發(fā)表的有關(guān)穿琥寧86 篇論文進(jìn)行分析，在24篇專題報道不良反應(yīng)的文章中，除1篇只寫“使用穿琥寧"外，其余23篇所報道的全部是水針劑。專家認(rèn)為:穿琥寧水針劑不穩(wěn)定，在室溫條件下有效期為30.5天，因穿琥寧為一個二萜類內(nèi)酯化合物，而且分子中有一共軛雙鍵，因而化學(xué)活性高，易發(fā)生水解反應(yīng)和氧化反應(yīng)，生產(chǎn)中還要進(jìn)行高溫滅菌，這又促進(jìn)了分解反應(yīng)。純凈穿琥寧水溶液微黃略顯綠色，但國內(nèi)市場上穿琥寧水針劑的色澤深，有的甚至變成了黃色或棕黃色。穿琥寧水針劑的毒副反應(yīng)主要為嬰幼兒泄瀉，發(fā)生率為22%;個別有白細(xì)胞銳減、過敏性休克、藥疹、抽搐、瘙癢、高熱、寒顫、呼吸困難、紫癜等。為了提高穿琥寧凍干粉針劑的質(zhì)量，本試驗(yàn)研究了“高純度穿琥寧生產(chǎn)工藝"超濾技術(shù)，應(yīng)用于該產(chǎn)品生產(chǎn)并與其它廠家同類產(chǎn)品進(jìn)行的動物急性毒性試驗(yàn)情況。

1 生產(chǎn)工藝

1.1 儀器 88-2型切向流超濾器，cl-25蠕動泵（軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院）;millipore超濾膜堆（截留分子量:5000）;Pilot2-4型冷凍干燥機(jī)（北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）;西林瓶洗、烘、灌聯(lián)動生產(chǎn)線。

1.2 藥品與試劑穿琥寧（注射級，成都天臺山制藥有限公司）;碳酸氫鈉（注射級，上海虹光化工廠）;右旋糖酐40（注射級，漯河華穎藥業(yè)有限公司）;活性炭（針用，上海活性炭廠）;滅菌注射用水（本廠生產(chǎn)）;乙醇（藥用，南陽天冠集團(tuán)酒精廠）;鹽酸、氫氧化鈉均為分析純試劑。

1.3 生產(chǎn)工藝（應(yīng)用超濾技術(shù)）（1）在無菌室（百級）配料間內(nèi)，將穿琥寧（原料藥）溶于50%乙醇，加0.5%～1%活性炭（注射級），在25～30℃溫度下，用鹽酸調(diào)ph為 6.5～6.7，攪拌30min，吸附原料在生產(chǎn)過程中因暴露空氣而帶進(jìn)的熱源物質(zhì)，充分回流，使色澤下降兩個色級;用分子截留量5000的超濾膜進(jìn)行超濾，將5000以上分子量的大分子植物蛋白截留下來;超濾液經(jīng)重結(jié)晶后用無熱原注射用水淋洗、濾干，進(jìn)入配料工序。（2）按千支計(jì)算，在無菌室（百級）配料間內(nèi)，精密稱取經(jīng)計(jì)算后處方量的穿琥寧精制品，攪拌加入1.5%碳酸氫鈉（注射級）溶液500ml，至溶解澄清;加10%右旋糖酐40（注射級）溶液 500ml，加無熱原滅菌注射用水至3000ml，混合均勻，調(diào)ph至7.7±0.2。取半成品檢驗(yàn)，定裝量，除菌過濾后，凍干，封口即得。

2 急性毒性試驗(yàn)

根據(jù)國家藥品監(jiān)督管理局《化學(xué)藥品和治療用生物制品研究指導(dǎo)原則》中化學(xué)藥品單次給藥的毒性研究（即急性毒性試驗(yàn)）指導(dǎo)原則，對注射用穿琥寧進(jìn)行了急性毒性試驗(yàn)，觀察受試藥物一次給予動物后所產(chǎn)生的急性毒性反應(yīng)和死亡情況。

2.1 試驗(yàn)樣品

2.1.1 注射用穿琥寧 我公司應(yīng)用超濾技術(shù)試制生產(chǎn)的20020322，規(guī)格0.2g，微黃色凍干塊狀物。臨用前以氯化鈉注射液稀釋至所需濃度。

2.1.2 注射用穿琥寧 我公司受黑龍江某制藥公司委托加工生產(chǎn)的200101163批，規(guī)格0.2g，微黃色凍干塊狀物。臨用前以氯化鈉注射液稀釋至所需濃度。

2.1.3 注射用穿琥寧 我公司在市場上購買的某制藥公司生產(chǎn)的020503-1批，規(guī)格0.2g，微黃色凍干塊狀物。臨用前以氯化鈉注射液稀釋至所需濃度。

2.2 試驗(yàn)動物 昆明種小鼠，購自河南省實(shí)驗(yàn)動物中心，合格證號:醫(yī)動字第99012號。動物飼料購自河南省實(shí)驗(yàn)動物中心，為標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料。

2.3 試驗(yàn)方法與結(jié)果（1）試驗(yàn)室溫度:（20±1）℃。（2）在預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上取健康小鼠180只，體重（19.0±2.0）g。雌雄各半，每個批號藥物隨機(jī)分為6組，每組10只。高低劑量的比值設(shè)定為1:0.9。根據(jù)預(yù)試驗(yàn)的結(jié)果，將受試藥物配制成不同濃度，20020322批號為45.00、40.50、36.50、32.80、29.50、26.60mg/ml;200101163批號為45.00、40.50、36.45、 32.81、29.52、26.57、23.91mg/ml;020503-1批號為44.55、40.10、36.09、32.48、29.23、 26.31g/ml，靜脈給藥，體積為0.25ml/10g體重，給藥速度為5s，給藥后即刻觀察，記錄動物的反應(yīng)和死亡情況。給藥后自高劑量組開始，部分動物出現(xiàn)靜伏少動、抽搐、四肢癱軟等現(xiàn)象，并呈抑制狀態(tài)死亡，動物可隨受試藥物濃度的不同，出現(xiàn)的反應(yīng)程度和死亡時間不同。死亡多發(fā)生在給藥后的 30min～48h內(nèi)，對死亡鼠立即進(jìn)行尸檢，肉眼觀察各主要臟器，未見明顯異常。對各組存活鼠逐日觀察1星期，動物的外觀行為、食欲、糞便未見明顯異常，試驗(yàn)結(jié)束時，存活動物體重分別增長至（25.3±2.7）、（26.1±3.4）、（27.2±3.8）g。實(shí)驗(yàn)結(jié)果用bliss機(jī)率單位計(jì)算ld 50 值及可信限，結(jié)果見表1、2、3。測得注射用穿琥寧靜脈給予小鼠的ld 50 值分別為:批號20020322為910.16mg/kg，其95%可信限為834.84～992.27mg/kg;批號20010163為 804.10mg/kg，其95%可信限為748.51～863.82mg/kg;批號020503-1為820.70mg/kg，其95%可信限為 758.94～887.49mg/kg。

3 討論

采用超濾技術(shù)生產(chǎn)的注射用穿琥寧ld 50 明顯高于其它廠家生產(chǎn)的同規(guī)格產(chǎn)品，單次靜脈給藥的ld ₅₀達(dá)到910mg/kg，而國家標(biāo)準(zhǔn)說明書中的ld ₅₀為675mg/kg［8］，文獻(xiàn)資料報道穿琥寧注射劑的單次靜脈給藥的ld₅₀達(dá)到580～620mg/kg［2］，因此，大大降低了注射用穿琥寧產(chǎn)品的毒性，提高了本品在臨床上使用的安全性。